淺析 自動頂空氣相色譜儀檢測乙醇消毒劑儀器配置及分析方法
《乙醇消毒劑衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》GB/T 26373-2010規(guī)定了乙醇消毒劑的原料要求和技術(shù)要求、應(yīng)用范圍、使用方法、檢驗方法、標(biāo)志和包裝、運(yùn)輸和貯存、標(biāo)簽和說明書及注意事項。適用于以乙醇為主要原料制成的乙醇消毒劑 ,包括乙醇與表面活性劑、食用色素、護(hù)膚成分和食用香精等配伍的消毒劑。不適用于乙醇與其他殺菌成分復(fù)配的消毒劑，也不適用以乙醇為溶劑的消毒劑。
對于乙醇消毒劑有效成分含量測定，公司采用頂空進(jìn)樣氣相色譜儀建立消毒液中乙醇含量測定方法，提高測定方法的靈敏度和準(zhǔn)確性。方法通過建立內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法，檢測消毒液中乙醇含量，并經(jīng)方法學(xué)驗證。結(jié)果用外標(biāo)法檢測，回收率為 80.3% ～ 90.1% ，蕞低檢測限為7. 90 mg / L，精密度為1.23% 。用內(nèi)標(biāo)法檢測，回收率為 95. 1% ～ 106. 4% ，蕞低檢測限為 1. 41 mg / L，精密度為1. 15% 。結(jié)論 內(nèi)標(biāo)法測定消毒液中乙醇含量比外標(biāo)法更為靈敏、準(zhǔn)確，重復(fù)性好。
1 材料與方法
1. 1 儀器及試劑材料
1.1.1 儀器：氣相色譜儀 ，配氫火焰檢測器( FID) ；頂空進(jìn)樣器；色譜柱( HP －INNOWAX，30m × 0. 25mm × 0. 25μm) ；電子分析天平；純水機(jī)；氮氫空氣源；色譜工作站。
1.1.2 試劑：無水乙醇( 分析純) ，正丁醇( 分析純) ，氯化鈉( 分析純) 均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，甲醇( Fisher Scientific，色譜純) ，超純水。
1. 2 實驗方法
1. 2. 1 儀器條件
進(jìn)樣口溫度 280℃ ，分流比70∶ 1；載氣為氦氣，流速 1. 0 ml / min。
升溫程序：50℃ ，保持 5 min；20℃ ，保持 3. 5 min；120℃ ，保持 2min；總運(yùn)行 10. 5 min。
FID檢測器溫度 240℃ ，空氣流速 300 ml/min，氫氣流速 30 ml/min。
1. 2. 2 外標(biāo)法
① 標(biāo)準(zhǔn)系列配制：用甲醇配制成乙醇質(zhì)量濃度分別為 0、100、300、500、1 000 及2 000 mg / L 的乙醇標(biāo)準(zhǔn)系列，進(jìn)樣 1 μl，測其峰面積，以乙醇峰面積對其含量繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
② 樣品處理：取樣品 1 ml，用甲醇定容至 10 ml 容量瓶中，混勻，逐級稀釋1 000倍。10 000 rpm 離心 10 min，通過自動進(jìn)樣器直接進(jìn)樣，進(jìn)樣量為 1 μl。每批樣品取 3 個平行樣，每樣重復(fù)測定 2 次。
1. 2. 3 內(nèi)標(biāo)法
① 對照溶液配制: 準(zhǔn)確稱取 1. 0 ～1. 1 g 正丁醇( 內(nèi)標(biāo)) ，1. 5 ～ 1. 7 g 乙醇，用純水定容至 10 ml 容量瓶中，稀釋 100 倍，進(jìn)樣 1 μl。
② 樣品處理：分別準(zhǔn)確稱取 0. 1 g 氯化鈉、1. 0 ～ 1. 2 g 正丁醇及 2. 0 ～ 2. 2 g 樣品( 根據(jù)樣品中乙醇含量高低確定樣品量，盡可能使得試樣與對照溶液中乙醇濃度相近) ，用純水定容至 10 ml 容量瓶中，混勻后，稀釋100 倍。10 000 rpm 離心 10 min，進(jìn)樣 1 μl。
1. 2. 4 方法學(xué)驗證
①回收率：外標(biāo)法，平行取 3份已知乙醇含量的免洗消毒液樣品約 0. 5 g，分別加入 0. 05、0. 25 和 0. 45 g 無水乙醇，用純水定容至 10ml 容量瓶中，混勻后，純水稀釋 100 倍。按照 1. 2. 1的儀器條件進(jìn)行檢測。內(nèi)標(biāo)法，分別稱取 0. 1 g 氯化鈉、1. 0 g 已知乙醇含量的消毒液樣品及 0. 8 g 無水乙醇，用純水定容至 10 ml 容量瓶中，混勻后，純水稀釋 100 倍。
②重復(fù)性：取同一批次的消毒液，配制 6 份供試品溶液，進(jìn)行乙醇含量測定，用相對標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。
③線性與范圍：外標(biāo)法，取對照品儲備液，稀釋成不同濃度樣品，采用擬定的色譜條件測定，以濃度( X) 對峰面積( Y) 進(jìn)行線性回歸，考察線性范圍。內(nèi)標(biāo)法，采用單點校正。
④蕞低檢測限：取無水乙醇的甲醇 ( 水) 溶 液，逐級稀釋，信 噪 比( S /N) 3∶ 1時對應(yīng)的乙醇濃度為蕞低檢測限。
2 結(jié)果
2. 1 色譜條件
經(jīng)測定顯示，外標(biāo)法甲醇和乙醇可達(dá)到基線分離；內(nèi)標(biāo)法分離度正丙醇與乙醇計算大于 9，理論塔板數(shù)不小于20 000。
2. 2 線性范圍和檢測限
測定時，將樣品稀釋到含乙醇 2 000 mg /L 以內(nèi)，允許其在選擇線性范圍，內(nèi)標(biāo)法采用單點校正；外標(biāo)法線性良好，線性方程 Y = 2. 926 × 104X +1. 630 × 105，r = 0. 9999。檢測限結(jié)果，外標(biāo)法為7. 90 mg / L，內(nèi)標(biāo)法為 1. 41 mg / L。定量限結(jié)果，外標(biāo)法為 26. 35 mg /L，內(nèi)標(biāo)法為 4. 70 mg /L。
2. 3 回收率試驗結(jié)果
回收率試驗結(jié)果表明，外標(biāo)法回收率為 80. 3%～ 90. 1% ，RSD 為 1. 35% ; 內(nèi)標(biāo)法回收率為 95. 1%～ 106. 4% ，RSD 為 1. 21% 。
2. 4 檢測精密度
取同一份含乙醇消毒液樣品，配制成待測樣品，分別平行測定 6 次，以 6 個結(jié)果求得精密度結(jié)果表明，外標(biāo)法為 1. 23% ，內(nèi)標(biāo)法為 1. 15% 。
3 討論
試驗結(jié)果顯示，用內(nèi)標(biāo)法檢測消毒液中乙醇含量，具有實驗條件影響小、準(zhǔn)確度和精密度較高等優(yōu)點。通過方法驗證看出，對于凝膠類基質(zhì)消毒劑，內(nèi)標(biāo)法結(jié)果優(yōu)于外標(biāo)法，而 2002 年版《消毒技術(shù)規(guī)范》中乙醇含量的測定采用的是外標(biāo)法。由于不同基質(zhì)消毒劑在水中或有機(jī)溶劑中溶解度不同，因而導(dǎo)致實際測定含量偏低。對于此類樣品采用外標(biāo)法直接進(jìn)樣分析檢測，會因為部分析出而導(dǎo)致測定濃度低于實際濃度。本實驗所用內(nèi)標(biāo)法通過加入氯化鈉增大樣品組分活動系數(shù)，使凝膠充分溶解，因而提高了加樣回收率。實踐證明，含乙醇的凝膠類及其類似劑形，推薦用內(nèi)標(biāo)法測定乙醇含量。
山東譜析科學(xué)儀器有限公司
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